De Opsporingsuitrusting van het geheel Bloed Snelle Antigeen, 150-250ul-de Testuitrusting van het Antigeenhuis

Met IVD Medisch Instrument om SARS-CoV-2 Neutraliserende Uitrusting van de Antilichamen Snelle Test te doen

Neutraliserende de Testuitrusting van Antilichamenfluerescent & Neutraliserende Antilichamen Snelle Test

De pseudovirus-neutraliserende antilichamenanalyse werd uitgevoerd als eerder beschreven (5). Kortom, Vero-de cellen werden gezaaid in de platen van 96 goed om monolayer op het tijdstip van besmetting te produceren. De Pretitratedbedragen van rVSV-SARS-Cov-2 [aar phCMV3-SARS-CoV-2 SARS-CoV-2-Pseduotyped vsv-δg-GFP (groene fluorescente proteïne) werden werd geproduceerd door HEK293T-cellen, ATCC crl-3216 transfecting] uitgebroed met in afleveringen verdund menselijk plasma bij 37°C 1 uur alvorens aan samenvloeiende Vero-celmonolayers (ATCC ccl-81) in de platen van 96 toe te voegen goed. De cellen werden uitgebroed 12 tot 16 uren bij 37°C in 5%-Co2.De cellen werden toen bevestigd in 4%-paraformaldehyde, met 1 μg/ml Hoechst wordt bevlekt, en imaged gebruikend imager van CellInsight CX5 om het totale aantal cellen te kwantificeren die GFP uitdrukken die. De besmetting werd genormaliseerd aan het gemiddelde aantal cellen besmet met rVSV-SARS-CoV-2 uitgebroed met normaal menselijk plasma. LOD werd gevestigd zoals <1:20 on="" the="" basis="" of="" plasma="" samples="" from="" a="" series="" of="" unexposed="" control="" subjects=""> 50(midden remmende concentratie) de titers werden berekend gebruikend één-Plaats Geschikte LogIC50 regressie in GraphPad-Prisma 8,0.

Een hoog op fluorescentie-gebaseerde neutralisatieanalyse

Om het hiaat voor serologische diagnose covid-19 en vaccinevaluatie in te vullen, ontwikkelden wij een op fluorescentie-gebaseerde analyse die en snel betrouwbaar neutralisatie van een verslaggever SARS-CoV-2 door antilichamen van geduldige specimens meet. De analyse werd voortgebouwd op een stal mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 waar het mNGgen bij ORF7 van het virale genoom werd gebouwd (Fig. 1a)10. De volledige opeenvolging van mNG SARS-CoV-2 wordt beschreven in Supplementair Fig. 1. De figuur 1B schildert het stroomschema van de analyse van de verslaggeversneutralisatie in af 96 goed formatteert. Het analyseprotocol is gedetailleerd in Supplementaire Methodes. Kortom, de geduldige serums waren in afleveringen verdund en uitgebroed met het verslaggeversvirus. Na incubatie bij 37°C voor 1   h, werd Vero CC-81 die cellen (in een goed plaat 96 worden pre-gezaaid) besmet met de virus/serummengsels bij een multipliciteit van besmetting (MOI) van 0,5. Bij 16   h post-besmetting, werden de mNG-positieve cellen gekwantificeerd gebruikend een lezer van de hoog gehalteweergave (Fig. 1B). Men zou moeten opmerken dat Vero CC-81 cellen, niet de cellen van Vero E6, voor de mNGanalyse werd verkozen om de nauwkeurige getalsmatige weergave van fluorescente cellen toe te laten. Zestig covid-19 serumspecimens van rechts-PCR-Bevestigde patiënten en 60 niet-COVID-19 die serumsteekproeven (vóór totstandkoming covid-19 worden gearchiveerd) werden geanalyseerd gebruikend het verslaggeversvirus. Voor sommige COVID-19-Positieve specimens, was het de dagen post-viral positief rechts-PCR van de steekproefinzameling beschikbaar en is vermeld in Lijst Table1.1. Naverslaggeversviralebesmetting, degewordencellengroenbij gebrek aanserum(Fig. 1c, bodempaneel); in tegenstelling, verminderde de incubatie van het verslaggeversvirus met geduldig serum covid-19 het aantal fluorescente cellen (hoogste paneel). Een dose-response kromme werd verkregen tussen het aantal fluorescente cellen en de vouwen van serumverdunning (Fig. 1d en Supplementair Fig. 2), wat voor de bepaling van de verdunningsvouwen dat geneutraliseerde 50% van fluorescente cellen toestond (NT50). De verslaggeversanalyse diagnostiseerde snel 120 specimens binnen 24   h: alle 60 covid-19 serums (specimens 1-60) toonden positief NT50van 35 tot 5711, en alle 60 niet-COVID-19 serums (specimens 61-120) getoond negatief NT50van <20> 1).

Parameter: